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華業(yè)建材裝飾市場在“新華路與靶場街交口”確切的說是“新華西路388憨俯封謊莩荷鳳捅脯拉號(hào)”哈哈哈……華業(yè)市場一樓是賣建材的,二樓是裝飾公司,我們公司——時(shí)空裝飾 就在華業(yè)二樓
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立邦漆(中國)有限公司座落于廣東省江門市 0750-3721177 3723377 是一家集科研、生產(chǎn)、銷售中高檔建筑涂料、家俱涂料、裝修漆等化工產(chǎn)品為一體的集團(tuán)企業(yè)。植物組織培養(yǎng)一般方法
家庭組織培養(yǎng) 植物的組織培養(yǎng)沒有最基本的條件和物品是搞不成的,當(dāng)時(shí)合理的利用一些最簡單的用具也并非無法辦到。 一、最必需的物品 1、.家用高壓鍋 1個(gè)最好大一點(diǎn)的,裝的東西多一點(diǎn)。用于培養(yǎng)基、無菌水等的消毒 2、接種箱 (無菌箱)1個(gè) ,需要自己自制,用一些木板和一塊玻璃和二尺布料。用于接種和轉(zhuǎn)移。 3、藥用天平1架 最好是500g稱量的,小一點(diǎn)也可以,主要用來稱瓊脂、糖等物品。 4、不銹鋼鍋或鋁鍋(煮湯、面條的那種)買。用于煮制培養(yǎng)基用的。 5、攪拌和分裝培養(yǎng)基用的調(diào)羹一個(gè),用于煮制和分裝培養(yǎng)基。 6、培養(yǎng)用的瓶子若干, 7、制棉塞用的棉花、紗布和線若干,用于做瓶口的塞子,要注意的是,棉花要使用普通做棉衣的棉花,不要用醫(yī)院用的脫脂棉,這樣容易穿塞污染。 8、牛皮紙、橡皮圈若干,用于包瓶頭和扎包頭紙用。 9、酒精燈1盞、解剖刀1把,刀片若干、鑷子2把、10ml、100ml量筒各一個(gè),2ml移液管1只、藥棉若干。 二、怎樣解決蒸餾水和基本藥品 培養(yǎng)基的用水在一般人的心目總是覺的十分重要的,其實(shí)是多余的擔(dān)心。冷開水、清潔的河水都是給以用的,并不影響培養(yǎng)的效果。市場上出售的純凈水更是一般培養(yǎng)基理想的用水。最常用、最必要、用量最大的只需購買以下幾種就行了。 1、MS培養(yǎng)基的大量元素(家庭或所謂袖珍組培室的培養(yǎng)一般采用MS基就可以了。)共5種。也可以買市售的MS培養(yǎng)基 (1)、*** (2)、*** (3)、 氯化鈣 (4)、*** (5)、磷酸二氫鉀 2、酒精 3、精密試紙(PH 5.4-7.0) 4、漂白粉或漂白精 5、瓊脂 6、白糖 7、福爾馬林 8、高錳酸鉀(可以到醫(yī)院或藥材商店去買) 9、微量元素、鐵鹽、維生素類以及激素類藥品應(yīng)用量極少。比如一些激素、維生素類的藥品及有針劑也有片劑,他們都有比較準(zhǔn)確的含量,你可以去按你的需要去配制比例。 愛好者在家庭環(huán)境下進(jìn)行組織培養(yǎng)的探討與建議植物組織培養(yǎng)技術(shù),尤其是快速繁殖,并非只有專業(yè)人員和專業(yè)實(shí)驗(yàn)室才能夠完成的。作為對(duì)多肉植物和組織培養(yǎng)有著濃厚興趣的愛好者,在充分利用家庭條件的基礎(chǔ)上,同樣可以制備出自己的試管苗來的。在我們進(jìn)行多肉植物的栽培中認(rèn)識(shí)到,一些比較名貴的園藝品種,比如:萬象、玉扇、壽、高紋鷹爪等十二卷屬品種,還是繽紛橄欖、何魯牽牛等塊莖類植物,甚至于星球?qū)?、巖牡丹屬等等,這些植物的常規(guī)繁殖系數(shù)很低,他們都可以采用組織培養(yǎng)來解決其繁殖問題,并且可以得到相當(dāng)數(shù)量的幼苗。對(duì)于奇想天外等種子萌發(fā)困難的植物,同樣可以借助組織培養(yǎng)來進(jìn)行無菌播種。在進(jìn)行組織培養(yǎng)過程中,不但可以對(duì)培養(yǎng)的植物有更深一層的認(rèn)識(shí),對(duì)常規(guī)的栽培有著相當(dāng)大的意義。許多搞組織培養(yǎng)的專家,最初都不是專業(yè)學(xué)組培的,就是憑著興趣和探索精神取得輝煌成績的。關(guān)鍵是,愛好者有著濃厚的興趣,非凡的觀察力和細(xì)致入微的操作,這些都可以彌補(bǔ)非專業(yè)的缺陷,并且可以充分利用日常生活中的各種可利用資源,這些就足以讓愛好者在家庭環(huán)境下完成組織培養(yǎng)了。同時(shí)這也不僅僅滿足了自己的興趣,還可以有一定的經(jīng)濟(jì)收益,甚至可以有所創(chuàng)新和發(fā)明。 一、如何解決場地和基本設(shè)備: 進(jìn)行組織培養(yǎng),沒有一定的設(shè)備是無法開展的。正規(guī)實(shí)驗(yàn)室的組織培養(yǎng)設(shè)備是昂貴的,不適合家庭消費(fèi),但如果能有途徑買到廉價(jià)的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備,那就在好不過了。如果沒有辦法搞到實(shí)驗(yàn)室設(shè)備,就不妨動(dòng)手自己制作一些簡單的設(shè)備。 1.無菌操作的主要設(shè)備——接種箱和壓力鍋: 接種箱:植物組織培養(yǎng)的主題操作需要在一個(gè)相對(duì)密閉的無菌環(huán)境中進(jìn)行。那么說我們首先要?jiǎng)?chuàng)造一個(gè)密閉的環(huán)境,可以利用一些木料、塑料板、有機(jī)玻璃、鋁合金骨架等等廉價(jià)的材料,動(dòng)手粘合一個(gè)小巧的接種箱。具體的參數(shù)可以找一本“食用菌栽培”的書籍,模仿種蘑菇的接種箱做一個(gè)即可。需要注意的是,組織培養(yǎng)的接種箱的密閉性要求比較高,盡量避免腐朽的木材和易生銹的材料,箱子的頂端按放兩盞燈:20w的紫外線燈和20w的日光燈。箱體的周邊盡量采用玻璃材料,因?yàn)檫@樣便于觀察,有時(shí)候接種箱還可以借用為培養(yǎng)箱,周邊采用玻璃材料更方便于觀察和培養(yǎng)。 高壓鍋:主要用來對(duì)培養(yǎng)基和其他材料的滅菌。在實(shí)驗(yàn)室通常使用醫(yī)用高壓滅菌器,然而在家庭要充分利用廚房使用的高壓鍋,高壓鍋的壓力要低于滅菌器,但是適當(dāng)延長滅菌時(shí)間,還是可以取得較好的效果的。比如:對(duì)培養(yǎng)基滅菌40分鐘就基本上可以達(dá)到滅菌效果(滅菌器是20分鐘);無菌水采用間歇滅菌法,先用高壓鍋壓40分鐘,放置24小時(shí),再壓20分鐘即可達(dá)到效果。 2.場地: 這個(gè)就因人而易了,總體的要求就是進(jìn)行組織培養(yǎng)操作的地方要盡量無塵,減少空氣流動(dòng),最好有一定的陽光。比如書房、寫字間都可以用來進(jìn)行無菌操作。 進(jìn)行培養(yǎng)基的配制可以借用一下廚房,但所使用的器具必須和廚具分開。一般說,組織培養(yǎng)中的幾乎全部化學(xué)物質(zhì)對(duì)人體是無害的,除了少數(shù)激素類物質(zhì)和滅菌劑。對(duì)于有毒害的物質(zhì),需要認(rèn)真保管,以免發(fā)生危險(xiǎn)。 3.輔助設(shè)備: 主要指冰箱,它是用來儲(chǔ)存化學(xué)物質(zhì)和培養(yǎng)基的。天平,可以采用感量在100克的托盤天平,甚至用中藥的藥衡都可以代替。培養(yǎng)架,這個(gè)就更簡單了,采用鋁合金-玻璃的培養(yǎng)箱既可以滿足要求,如果日光不足,可配合日光燈補(bǔ)光等。 4.化學(xué)試劑: 化學(xué)試劑是不可缺少的,因?yàn)榻M織培養(yǎng)的核心就是培養(yǎng)基的成分,而并不是簡單的無菌操作。一些用量較大的化學(xué)物質(zhì)是有必要買的,比如大量元素(***、***、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、氯化鈣等)、高錳酸鉀、甲醛、酒精、白砂糖、瓊脂等等。微量元素和有機(jī)復(fù)合物不需要購買,因?yàn)樗鼈兊挠昧亢苄?,我們可以用蔬菜浸汁或者馬鈴薯浸汁來代替。激素是必不可少的,他們的稱量需要借助分析天平,但這是家庭條件所不允許的,如果有條件可以借助關(guān)系單位代替配成母液,每次取一些使用即可。最好的辦法是到農(nóng)資商店(賣農(nóng)藥化肥的地方),它們一般出售農(nóng)業(yè)用的激素,有的是用安瓿裝的,按照一定的比例加入到培養(yǎng)基當(dāng)中即可。近幾年來,有些化學(xué)品公司開始生產(chǎn)植物組織培養(yǎng)基原粉,只需要稱取一定量加水即可,很方便。比如泛生化學(xué)品公司生產(chǎn)的ms原粉,只需要稱量40克,加1升水,用微波爐加熱5分鐘即可分裝,相當(dāng)簡便。 消毒劑通常采用***(劇毒),如果不容易搞到,可以用漂白粉代替。 調(diào)節(jié)酸堿度時(shí),可以采用家庭常用的純堿和白醋。 5.培養(yǎng)容器和玻璃儀器: 組織培養(yǎng)的容器要求并不高,只要玻璃顏色為透明色即可(鈉玻璃不可以)。 我們可以到垃圾站去看看,撿回一些廢舊的果醬瓶就可以了。比較好用的是阿香婆辣醬瓶,我們實(shí)驗(yàn)室也是采用的這種瓶子。瓶子的封口膜采用聚丙烯塑料即可,如果不好找到,可以采用微波爐專用的錫箔紙甚至方便面的袋子,折疊成雙層,用橡皮圈固定即可。 其它玻璃儀器,比如燒杯、玻璃棒都可以用家庭的杯子和筷子代替;一些度量儀器,如量筒和移液管最好到玻璃儀器商店購買,恐怕花不了20元錢就可以配置一套相當(dāng)棒的組培玻璃儀器。 6.其它: 還有一些用品是必需的。比如精密ph試紙(5.4~7.0),需要買一本,大約花1.5元即可搞定;酒精燈也不需要買,用墨水瓶配上一個(gè)玻璃環(huán),再加上一個(gè)棉花芯,最后用農(nóng)夫山泉礦泉水的瓶蓋做燈冒,這樣的酒精燈很小巧,適合接種箱使用。刀子剪子鑷子是必需的,到花市的工具攤位上,花10元錢全部搞定,注意選比較小巧的工具。 關(guān)于用水,按理說應(yīng)該使用蒸餾水,但是我們家庭飲用的純凈水比蒸餾水還要純,那么說借用一些飲用水就可以了。我們?cè)?jīng)采用康師傅純凈水進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng),效果都是很不錯(cuò)的,更何況于植物細(xì)胞培養(yǎng)了。 以上是組織培養(yǎng)的基本設(shè)備和試劑,主要突出了他們相關(guān)的替代品,因?yàn)樽鳛榻M織培養(yǎng)中的快速繁殖,它的要求是相當(dāng)?shù)偷?。我們的家庭培養(yǎng)和工廠化是不同的,工廠化生產(chǎn)組培苗要追求高增殖率,所以它的要求就比較精細(xì)和標(biāo)準(zhǔn)。我們的家庭培養(yǎng)則不需要那么準(zhǔn)確,只要達(dá)到培養(yǎng)成功的目的即可。當(dāng)然,如果想提高增殖倍率和試管苗的品質(zhì),必須盡量貼近實(shí)驗(yàn)室的用具和器材,代用品總是有一定的缺陷的。 (一)必須的設(shè)施物品及代用品 1、代用品 家庭用的電冰箱,可用于貯存培養(yǎng)基母液(4℃)及需低溫貯存的藥品(如生物調(diào)節(jié)劑)。 高壓鍋:它可用于培養(yǎng)基、無菌水、玻璃器皿及其他組培用具的消毒滅菌。如所用水硬度大可用涼白開水,進(jìn)行消毒滅菌。避免被消毒滅菌物品表面結(jié)垢。 不銹鋼鍋或鋁鍋:它可用于培養(yǎng)基、溶化瓊脂(起水浴鍋?zhàn)饔茫┘敖M培用具消毒滅菌。 刷凈的廢棄食油桶:它可以用來貯存蒸餾水。 小白瓷碟:可以用于接種及盛放消毒液(若放消毒液,就不要再食用,以免中毒)。 日光燈:它可用于組培過程中光源補(bǔ)充。 洗凈廢棄的罐頭瓶:它可以用于組培培養(yǎng)之用,代替錐形瓶、試管。 組培場地可在自己的房間內(nèi)進(jìn)行。在配制培養(yǎng)基和接種時(shí),不要趕在家庭成員較多時(shí)進(jìn)行,如室內(nèi)已安裝了空調(diào),那么在初代培養(yǎng)和繼代培養(yǎng)、乃至小苗過渡時(shí)均有好處。 2、自制用具 (1)接種箱的制作:組培過程中的超凈工作臺(tái)是很貴重的設(shè)備。如果我們用自制的接種箱來代替,就可以大大節(jié)省開支,有利于普及。 自制的接種箱的用料,可以是膠合板、纖維板、玻璃(3毫米厚)、木條(裝修房屋用的龍骨),甚至可以用使紙板的包裝箱(包裝箱的質(zhì)量要稍好一些的,如電視機(jī)的包裝箱),也可以用有機(jī)玻璃。 其接種箱的大小,可以根據(jù)各自的家庭條件制作。制作太小不便于操作,但相對(duì)來說消毒容易,且占地較少;制作較大的便于操作,但消毒工作顯得不易,且占地面積較多。一般來說作成70厘米長、45厘米寬。50厘米高較為合適。 (2)培養(yǎng)箱的制作:培養(yǎng)箱可代替培養(yǎng)室,也可以用于過渡苗使用。它可以用玻璃制作,或利用長方形魚缸。因此,可用玻璃粘結(jié)制作。其大小可按自己家庭居室面積和組培的量來決定。 3、需購置用具 普通天平(500克):用于稱量配制培養(yǎng)基藥品,或用稱量金銀、中藥的戥子稱,用于稱量配制培養(yǎng)基藥品、微量元素及生物調(diào)節(jié)劑;或購買微量元素及生物調(diào)節(jié)劑時(shí),買已分裝的。酒精燈1盞:用于接種時(shí),灼燒消毒滅菌。漏斗(亦可用購買桶裝食用油,所配給的漏斗):用于分裝培養(yǎng)基用。長鑷子2把:用于接種。解剖刀2把、刀片若干:用于接種。10、50、100毫升量筒各1個(gè):用于配制培養(yǎng)基用。長把牛角勺2把:用于配制培養(yǎng)基取藥品。1、2、5毫升移液管各1個(gè):用于配制培養(yǎng)基用。 耐高溫塑料膜或牛皮紙:用于包扎培養(yǎng)瓶口及表糊自制接種箱內(nèi)部棱角處。橡膠圈:用于綁扎培養(yǎng)瓶口。脫脂棉:用于操作人員及組培用具酒精棉球消毒。pH(5~7)試紙1本:用時(shí)可剪成小條檢測培養(yǎng)基pH值。酒精1瓶:用于酒精燈及消毒。漂白粉1瓶:用于消毒。福爾馬林1瓶:用于接種箱消毒(在每次操作前2~10小時(shí),將10~20毫升福爾馬林倒入小白瓷碟內(nèi),在操作前取出)。MS培養(yǎng)基所需藥品;用于配制培養(yǎng)基。鹽酸及***:用于調(diào)pH值。如若購置1盞紫外燈,進(jìn)行室內(nèi)及接種箱消毒更為理想。 (二)操作時(shí)注意事項(xiàng) 家庭操作與單位不同,因而要注意以下事項(xiàng):要注意安全,妥善保管藥品。特別對(duì)老人和小孩;操作時(shí)要消毒仔細(xì)嚴(yán)格,接種時(shí)操作人員戴好口罩、工作帽,避開電風(fēng)扇及大風(fēng)沙天氣,家庭成員多時(shí)避免操作;消毒前后避免家庭所養(yǎng)寵物進(jìn)人工作間;藥品稱量要準(zhǔn)確無誤;如果家庭不具備溫度調(diào)控(如調(diào)溫空調(diào)),應(yīng)避免在盛夏、寒冬進(jìn)行;紅掌組培要一步步來作,可先作容易組培的花卉,待取得經(jīng)驗(yàn)后再做難作的花卉。 1.培養(yǎng)容器和玻璃儀器的準(zhǔn)備: 進(jìn)行培養(yǎng)基的配制首先要準(zhǔn)備好培養(yǎng)瓶和配制使用的玻璃儀器。培養(yǎng)瓶一般使用各種果醬瓶,要先用洗潔精浸泡瓶子4~8小時(shí),再用流水沖洗數(shù)次。其他的玻璃儀器同樣需要這樣清潔,直到玻璃壁上不掛水珠而是成為水膜為止。清洗完畢的玻璃容器要倒扣,空去瓶內(nèi)的水。 清洗干凈的容器要注意防塵,盡量放置在玻璃柜中。更簡單的是用干凈的毛巾將容器蓋住。 移液管要用吸球來清洗,反復(fù)用蒸餾水吹吸直到潔凈為止,將移液管放置在一個(gè)長筒中,便于使用。一般移液管只能使用一次,即要清洗,所以有多必要準(zhǔn)備幾只移液管,建議:10ml/2支,5ml/2支,1ml/5支。 2.培養(yǎng)基的配制: 經(jīng)典的組織培養(yǎng)用培養(yǎng)基是ms配方,其基本上劃分為:大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)復(fù)合物、植物激素、糖和支持物。這些成分的用量都在毫克級(jí),用普通天平是難以稱量的,為了解決這個(gè)問題,我們可以按比例放大各成分的用量配制成母液,使用的時(shí)候按一定比例加入即可。 下面將一種ms培養(yǎng)基的母液配制方案公布如下: 大量元素:***66.0克; ***76.0克; 無水氯化鈣13.3克; 七水硫酸鎂14.8克; 磷酸二氫鉀6.8克。 以上分別溶解后合并定容到1升,每配制1升標(biāo)準(zhǔn)ms培養(yǎng)基取25毫升。 鐵鹽:七水硫酸亞鐵5.56克; 乙二胺四乙酸二鈉(edtana)7.46克。 以上兩種分別加熱溶解,混合,定容到1升,調(diào)整ph到5.5以下,每配制一升ms取5毫升。 微量元素和有機(jī)復(fù)合物的用量過于微小,為了簡便我們可以用蔬菜提取液或者馬鈴薯提取液代替。通常我們習(xí)慣用100克菠菜加100ml的水煮沸10分鐘,過濾留濾液,每配制1升ms培養(yǎng)基加入20~50毫升提取液。同樣也可以使用帶皮馬鈴薯100克加200毫升水煮沸15分鐘,過濾留濾液,每升ms加入50~100毫升即可。 加入上述各組分后,每升ms培養(yǎng)基還需要加入白砂糖30克,瓊脂7克。 這里要說明的是,糖和瓊脂都是可變的量,要根據(jù)需要調(diào)整。另外制作果凍用的卡拉膠也可以代替瓊脂,透明度更好。 上述各成分加入后,定容到800毫升左右,用微波爐加熱,直到瓊脂全部溶解為止。此時(shí)加入所需的植物激素(通常配制成0.1%溶液,這樣每取1毫升,換算到培養(yǎng)基中就是1ppm)。然后加水定容到1100毫升(1.1升),之所以多出0.1升是為了抵消分裝和消毒中的損耗。最后用酸堿調(diào)整ph到5.8~6.0。 3.使用ms原粉配制培養(yǎng)基: 目前國內(nèi)的一些化學(xué)品公司開發(fā)了簡便的ms培養(yǎng)基原粉,大大簡便了培養(yǎng)基的配制,根據(jù)不同公司的說明選擇培養(yǎng)基的種類。下面就以ms原粉為例: ms培養(yǎng)基原粉,包括了大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)復(fù)合物、糖和瓊脂,一般按使用方法稱量,微波爐加熱溶解,加入激素,定容到1100毫升(1.1升),調(diào)整ph值到5.8~6.0。 4.分裝: 將配制好的培養(yǎng)基分裝在培養(yǎng)容器中,注意要趁熱分裝,因?yàn)榄傊?0度以下就會(huì)凝固。每個(gè)培養(yǎng)瓶裝培養(yǎng)基大約是瓶容積的1/6~1/5,注意不要將培養(yǎng)基掛在瓶的外壁,這樣容易造成污染。分裝后用聚丙烯薄膜或著方便面的袋子封口,用膠圈固定(膠圈盡量選擇自行車的內(nèi)胎,這種膠圈比較耐熱)。 5. 滅菌: 采用家庭壓力鍋消毒,建議到醫(yī)療器械用品商店買一些“滅菌效果試紙”,它們可以指示滅菌效果,當(dāng)滅菌達(dá)到效果時(shí)會(huì)變色。把試紙和培養(yǎng)基同時(shí)放入鍋內(nèi),加熱到有大量蒸汽冒出,再加上壓力伐,維持小火30~40分鐘。 滅菌完畢后自然冷卻,將培養(yǎng)基取出,放在陰涼無塵處備用。 6. 接種箱的準(zhǔn)備: 新制作的接種箱必須要清潔干凈,盡量做到無死角。每次使用前2小時(shí),將操作所需要的全部物品放入接種箱,再用一個(gè)小燒杯加入3~5克高錳酸鉀放入接種箱內(nèi),在箱內(nèi)向燒杯中倒入2~3毫升的***,大約幾秒鐘后會(huì)看到甲醛蒸汽出現(xiàn),這樣可以對(duì)接種箱內(nèi)的所有物品進(jìn)行初次消毒;同時(shí)打開紫外線燈照射。紫外線燈是高電壓穿激汞蒸汽產(chǎn)生的,紫外線進(jìn)行第二道滅菌,在紫外線照射大約15分鐘后,會(huì)激發(fā)氧氣形成臭氧,臭氧作為第三道滅菌防線,這樣經(jīng)過三次滅菌,接種箱基本上可以達(dá)到無菌標(biāo)準(zhǔn)。 在操作前15分鐘內(nèi),向剛才蒸發(fā)甲醛用的燒杯中倒入5毫升濃氨水,因?yàn)榧兹?duì)人體有毒害作用,氨水可以和甲醛形成一種叫做“***”的固體物質(zhì),從而中和了甲醛的刺激性蒸汽。這個(gè)時(shí)候紫外燈不要關(guān)掉,要繼續(xù)照射,直到操作前5分鐘關(guān)閉,維持黑暗5分鐘,然后再打開日光燈進(jìn)行操作。維持5分鐘黑暗的原因是,紫外光對(duì)微生物的殺滅是作用于dna的胸腺嘧啶,形成四聚體,但是微生物具有一種光復(fù)活蛋白,可以在有可見光的環(huán)境下還原胸腺四聚體,而使微生物復(fù)活,這個(gè)作用叫做“光復(fù)活作用”,所以在關(guān)掉紫外燈后必須維持黑暗幾分鐘,避免光復(fù)活作用的出現(xiàn)。 怎樣在家庭開展組培工作 制備 家庭組培因受到條件的限制,不可能配置大量的配養(yǎng)基,,一般每次配置1升為宜。煮制后用PH試紙測定后,分裝成35-40瓶,塞好棉塞,包好包頭紙。(棉塞一定要用作棉衣的棉花卷制,不能使用脫脂棉,然后用紗布包緊,用棉線扎好。棉塞的松緊以手提棉塞瓶子不滑落為宜。)然后放入高壓鍋里高壓滅菌,待高壓鍋噴嘴噴出蒸汽時(shí),扣上壓力閥,從壓力閥噴氣時(shí)起計(jì)時(shí),連續(xù)維持15-20分鐘后關(guān)火,壓力消失后,打開鍋蓋,取出配養(yǎng)基,放入接種箱內(nèi)待用。初次實(shí)驗(yàn)時(shí),滅菌后的培養(yǎng)基應(yīng)放置三五天后,觀察無霉菌生長時(shí)才能使用。如有霉菌長出,這說明滅菌時(shí)間不夠,,需要適當(dāng)增加滅菌時(shí)間。 接種 將滅菌后的配養(yǎng)基、無菌水、消毒藥水及使用的器材放入接種箱內(nèi),因接種箱內(nèi)的體積相對(duì)較小,所以所用的一切物品都要有序地?cái)[放在相應(yīng)的位置上,不能隨意擺放,箱內(nèi)濕度較大,點(diǎn)酒精燈一定要是用打火機(jī),不要使用火柴。要特別注意準(zhǔn)備好裝污水、污物的容器,盡可能地大一些,因?yàn)椴僮鲿r(shí)是不容許開箱取物的。把所有的物品放置好以后,將一裝有10-20ml福爾馬林的磁杯放入箱內(nèi)(最好不要使用玻璃杯,因反應(yīng)時(shí)溫度較高,容易炸裂。),倒入2-5g高錳酸鉀(PP粉),使其蒸氣充滿箱內(nèi),達(dá)到滅菌的效果。這時(shí)要將接種箱的通氣孔和操作孔封閉好,避免甲醛蒸氣很快散盡。待箱內(nèi)蒸氣散盡后,才能開始接種工作,這段時(shí)間大約需要5-10個(gè)小時(shí)。 接種時(shí),揭去密封在接種箱通氣孔和操作孔上的密封物,取出熏蒸用的磁杯,將接種用的材料送入接種箱內(nèi),開啟紫外線燈,十五分鐘后關(guān)閉紫外線燈,開啟照明燈,即可開始工作。操作時(shí)一定要樹立無菌觀念,要把一切物品都看成是帶菌的,要時(shí)時(shí)都注意防范。工作是由于箱內(nèi)溫度較高,濕度較大,手容易出汗,所以每接種一瓶后都要用酒精擦拭手指,也可以戴指套。另外,操作時(shí)要注意防火,由于空間較小,一不小心就容易燒傷手指或引起酒精起火。打開瓶塞時(shí),要將瓶口置于酒精燈上方,用右手的無名指和小指夾住棉塞尾,輕輕將棉塞拔出,棉塞不能置于箱內(nèi)物品上,應(yīng)用手指夾住,接種后,將瓶口在酒精燈上燒灼一下,棉塞也燒灼一下,,然后在酒精燈火焰上方輕輕塞好,扎好包頭紙,用鉛筆標(biāo)明品種、接種日期、編號(hào)等,然后重復(fù)下一瓶。 其實(shí),用接種箱接種與超凈工作臺(tái)相比較,工作時(shí)人要感覺舒適得多。污染率也是很低的,操作熟練后幾乎沒有什么污染發(fā)生。接種后愈傷組織分化、小苗分化、生長狀態(tài)與在超凈臺(tái)上接種的沒有什么兩樣。 培養(yǎng) 在家庭的業(yè)余條件下培養(yǎng)培養(yǎng)的條件不可能得到??兀砸浞值睦米匀粭l件,接種后的培養(yǎng)瓶可以放在有較強(qiáng)散射光的地方,如靠窗的書柜、寫字臺(tái)上,但要避免日光直射,一般室溫在22-28攝氏度時(shí)都能正常生長,不是特殊的品種不需要特殊的護(hù)理。如室溫太低,可以用紙板、木條、塑料薄膜做一個(gè)簡單的培養(yǎng)箱,里面裝一兩個(gè)15-25瓦的白織燈,既可以補(bǔ)助光照也可以提高培養(yǎng)的溫度。夏天溫度過高時(shí),有條件的可以擺放在空調(diào)室內(nèi),,沒有空調(diào)室的,降溫雖然困難一些,但大多數(shù)試管苗是可以耐受的,不至于死去。小苗長出后,擺放在書柜或工作臺(tái)上,感到自己培養(yǎng)出來的生機(jī)勃勃的小生靈,無疑是一種享受。 栽培 當(dāng)小苗長到一定的時(shí)候,就可以配置一些生根配養(yǎng)基將小苗轉(zhuǎn)移培養(yǎng)生根,待長出一定根系時(shí),就可以出瓶種植了。小苗出瓶種植的時(shí)候一定要注意以下幾個(gè)方面,一是要適當(dāng)降低溫度;二是要增大濕度;三是要嚴(yán)格控制雜菌危害;四是要保證種植介質(zhì)的疏松透氣;五是要保證適當(dāng)?shù)墓庹?。我通常是用跖石、木屑、稻谷殼混合作基質(zhì),把小苗種植后用百菌清噴霧澆根,蓋上塑料薄膜,少量的小苗干脆用玻璃杯蓋住,大約15天后就能揭去覆蓋物,便可進(jìn)行正常管理了。 家庭開展組培其實(shí)也并不是一件什么很困難的事情,只要多開動(dòng)腦筋,多想一些辦法,做起來也是很容易地。萬事開頭難,辦法總比困難多。我1974年在一個(gè)縣烤煙研究所里當(dāng)所長,原來?xiàng)l件不允許,科研經(jīng)費(fèi)很緊張,剛開始的時(shí)候,一年的科研經(jīng)費(fèi)只有3000元,那年我做過煙草的花藥單倍體、水稻花藥培養(yǎng)、柑桔胚乳培養(yǎng)、黑皮果蔗莖尖組織培養(yǎng)、田三七愈傷組織培養(yǎng)、黑節(jié)草(石斛)種子的無菌培養(yǎng)、體細(xì)胞融合,都獲得了很好的成績,我們就是用這種方法做的,當(dāng)時(shí)北京、上海很多的研究單位來看了很吃驚,他們認(rèn)為很珍貴的組培小苗,被我們丟得到處都是,覺的不可思議,他們做不出來的,竟然在我們一個(gè)十分閉塞的山區(qū)里可以做出來。我說這個(gè)話的意思不是為自己吹噓擺功,而是告訴想從事這個(gè)行業(yè)的朋友,不要自己把自己的能量看得太低,也不要迷信權(quán)威、只要自己有信心,嚴(yán)格地按照科學(xué)的規(guī)律去做,沒有什么做不了的,沒有什么辦不到的。 家庭組培培養(yǎng)基的選擇與效果評(píng)價(jià) 選擇合適的培養(yǎng)基是植物組織培養(yǎng)成功的基礎(chǔ)。 選擇合適的培養(yǎng)基主要從以下兩個(gè)方面考慮:一是基本培養(yǎng)基;二是各種激素的濃度及相對(duì)比例。 MS培養(yǎng)基適合于大多數(shù)雙子葉植物,B5和N6培養(yǎng)基適合與許多單子葉植物,特別是N6培養(yǎng)基對(duì)禾本科植物小麥、水稻等很有效,White培養(yǎng)基適合于根的培養(yǎng)。 首先試用這些培養(yǎng)基進(jìn)行初步實(shí)驗(yàn),可以少走彎路,大大;減少時(shí)間、人力和物力的消耗。當(dāng)通過一系列初試之后,可再根據(jù)實(shí)際情況對(duì)其中的某些成分做小范圍調(diào)整。 在進(jìn)行調(diào)整時(shí),以下情況可供參考。一是當(dāng)用一種化合物作為氮源時(shí),硝酸鹽的作用比銨鹽好,但單獨(dú)使用硝酸鹽會(huì)使培養(yǎng)基的PH向堿性方向漂移,若同時(shí)加入硝酸鹽和少量銨鹽,會(huì)使這種漂移得到克服。二是當(dāng)某些元素供應(yīng)不足時(shí),培養(yǎng)的植物會(huì)表現(xiàn)出一些癥狀,可根據(jù)癥狀加以調(diào)整,如氮不足時(shí),培養(yǎng)的組織常表現(xiàn)出花色苷的顏色(紅、紫紅色),愈傷組織內(nèi)部很難看到導(dǎo)管分子的分化;當(dāng)?shù)?、鉀或磷不足時(shí),細(xì)胞會(huì)明顯過度生長,形成一些十分蓬松,甚至呈透明狀的愈傷組織;鐵、硫缺少時(shí)組織會(huì)失綠,細(xì)胞分裂停滯,愈傷組織出現(xiàn)褐色衰老癥狀;缺硼時(shí)細(xì)胞分裂趨勢緩慢,過度伸長;缺少錳或鉬時(shí)細(xì)胞生長受到影響。 培養(yǎng)基外源激素的作用也會(huì)使培養(yǎng)物出現(xiàn)上述一些類似的情況,所以應(yīng)仔細(xì)分析,不可輕易下結(jié)論。
(2013?包頭二模)如圖所示,是某魚缸水溫調(diào)節(jié)器的原理圖,其中R1為阻值可調(diào)的電熱絲,開關(guān)S2為單刀雙擲開關(guān).開關(guān)S1閉合、S2接b時(shí),電路處于加熱狀態(tài);當(dāng)開關(guān)S1斷開、S2接a時(shí),電路處
(1)當(dāng)電路處于加熱狀態(tài)時(shí),等效電路圖如下圖所示:
通過電阻R2的電流:
I2===0.25A;
(2)當(dāng)電路處于保溫狀態(tài)時(shí),等效電路圖如下圖所示:
電路的總電阻R===1000Ω,
則R1=R-R2=1000Ω-880Ω=120Ω;
(3)當(dāng)電路處于加熱狀態(tài)時(shí),等效電路圖如下圖所示:
水需要吸收熱量:
Q=cm△t=4.2×103J/(kg?℃)×48.4kg×2℃=406560J,
電路中的總電阻:
R總===105.6Ω,
此時(shí)電路的總功率:
P加熱′===W,
加熱時(shí)間:
t====8870.4s.
答:(1)通過電阻R2的電流約為0.25A;
(2)電熱絲R1連人電路的阻值應(yīng)為120Ω;
(3)加熱需8870.4s.
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