斑馬魚轉(zhuǎn)基因(斑馬魚轉(zhuǎn)基因的原理)

序列到NCBI上去查，物種選Zebrafish或Danio rerio，將目的基因與質(zhì)粒載體構(gòu)建重組質(zhì)粒，最好再接個報告基因，比如EGFP，和I-SceI一起共顯微注射到單細(xì)胞期階段斑馬魚胚胎中，溶液配方質(zhì)粒 0.5-1lI-SceI Buffer(10×) 1lI-SceI enzyme 1ldd H20 補足10l 質(zhì)粒終濃度 50-100ng/l，注射量2nl/per，

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本文目錄一覽：

• 1、你好，我想問問關(guān)于斑馬魚轉(zhuǎn)基因的一般試驗方法。我是對轉(zhuǎn)基因沒有一點兒基礎(chǔ)的人。
• 2、斑馬魚轉(zhuǎn)基因載體?是否需要轉(zhuǎn)染細(xì)胞檢測載體正常表達
• 3、斑馬魚是很多人的第一個轉(zhuǎn)基因?qū)櫸?/a>

你好，我想問問關(guān)于斑馬魚轉(zhuǎn)基因的一般試驗方法。我是對轉(zhuǎn)基因沒有一點兒基礎(chǔ)的人。

序列到NCBI上去查，物種選Zebrafish或Danio rerio。

將目的基因與質(zhì)粒載體構(gòu)建重組質(zhì)粒，最好再接個報告基因，比如EGFP。

和I-SceI（大范圍核酸轉(zhuǎn)移酶）一起共顯微注射到單細(xì)胞期階段斑馬魚胚胎中（產(chǎn)后30分鐘），溶液配方

質(zhì)粒 0.5-1μl

I-SceI Buffer(10×) 1μl

I-SceI enzyme(5u/μl) 1μl

dd H20 補足10μl

質(zhì)粒終濃度 50-100ng/μl，注射量2nl/per。

斑馬魚轉(zhuǎn)基因載體?是否需要轉(zhuǎn)染細(xì)胞檢測載體正常表達

最好做下細(xì)胞轉(zhuǎn)染，看看你用的報告基因表達沒有，一般會在載體里面加一段gfp之類的基因。這樣的話轉(zhuǎn)基因魚可以在熒光顯微鏡下觀察，以便于篩選成功的胚胎。不過你也可以同時做，即轉(zhuǎn)染細(xì)胞同時注射胚胎，這樣出了問題可以直接分析。有一些細(xì)胞內(nèi)可以表達的注射后就不表達了，也遇到過這種情況。

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